细胞能量代谢服务Seahorse XF实验中常见问题（二）

Qustions&解答Answers

Seahorse XF 实验常见问题及解答

16可以在Seahorse检测液中加入血清吗？

不建议加入血清（如：FBS），因为其会影响检测液的缓冲能力，并可能与进行检测的药物/化合物发生非特异性结合而影响检测效果，同时容易产生气泡。另外，使用加入血清的检测液溶解药物加载至探针板加药孔中进行注射时，会出现漏药或加药注射失败。

17加入底物的检测液在多长时间内可保持稳定？或可以提前配好检测液和药物吗？

Seahorse检测液在实验当天现用现配。药物也要现配现用，溶解后的药物要一次性用完，剩余的也不能用于下次实验了。

18 Seahorse XF糖酵解压力试剂盒中的药物状态看上去很奇怪，是否有质量问题（或其他试剂盒中部分药物）？

如Glycolysis stress test kit中的2-DG，该药可能是透明的液体、不透明的（白色的）固体，也可能是白色固体与透明液体的混合物，以上药物状态均不影响其性能，可按照说明书正常溶解使用。

19使用pH 7.4 的 XF DMEM 或 RPMI 基础培养基制备检测液时，加上Seahorse的三个底物，是否就无需调整pH了？

是的。使用推荐的 XF 三个底物，能确保分析培养基最终 pH 值的准确。如果使用其他供应商提供的其他品牌的补充剂，则无法保证培养基pH 值的准确。启封后的pH7.4的DMEM或RPMI基础培养基，尽可能在一个月内用完，以免pH值因为空气中的CO2进去，影响pH值。

20Seahorse的基础培养基与其他厂家的有啥不同？

Seahorse XF 培养基专用于 XF 分析，推荐研究者使用，以获得最佳试验结果。XF 培养基以标准细胞培养基组分（DMEM 或 PRMI）为基础，做了以下这些方面改进：

无碳酸氢盐和低缓冲容量：利于细胞外酸化率的检测

无底物添加：适用于用户的各种不同需求

低浓度酚红或无酚红：确保 pH 值测量的准确性

21请问进行FAO实验时，能够在探针板上加载BSA-palmitate使其在上机测量时自动注射入细胞孔吗？

Agilent建议将BSA-palmitate或相似底物在培养细胞时做预处理。如果实验存在合理依据需在上机测量时通过注射加BSA-palmitate、血清或其他类似底物，请联系相关技术支持。

22 为何不能使用XF base medium配制的检测液进行Glycolytic rate与real-time ATP rate两个实验？

XF base medium中含有酚红，该物质会影响这两个实验的测量。

23 为何不能使用GlutaMAX来代替Glutamine呢？

不建议使用GlutaMAX来配制检测液。因加入GlutaMAX后，还需细胞进一步将其转化为glutamine，这可能会影响线粒体对Glutamine氧化的动力学过程。

24 检测液的pH对XF实验非常重要吗？

是的，Seahorse XF实验通过测定细胞代谢物（如：氧和质子）的变化来确定OCR 和ECAR，而检测液pH会影响这些代谢物的产生或消耗，因此保持检测液一致的 pH（37℃，pH=7.4± 0.1）非常重要。

25 FluxPak中的水化板可以替代细胞培养板吗？

不可以，虽然水化板与细胞培养板结构相同，但不能用来培养细胞。

26 Seahorse 探针板上机前加药，需要注意什么？

加药时同样方法，枪头抵着加药孔壁大约与水平面呈45°度角，将液体一次性加入到加药孔中，注意板子始终保持在平面上，加完药的探针板不能晃动，以免加入的液体漏入水化板中。（24的机型，在加药前需要取下粉色的水化辅助板）；

27 Seahorse 细胞板上机时候，放进去应该就可以了？

探针板和细胞板放入仪器时，朝向为A1孔朝向机器内部，记得把盖子拿掉；

28 Seahorse XF报告生成器中的代谢数据是如何计算的？

在每个试剂盒的Seahorse XF报告生成器的用户指南中详细列出了数据的计算公式，请参阅。